abmart抗体，IL1β，βtubulin，好像有效
爱学的菜路
2024-10-01 04:16:07
wb小白，科研研一新手。[萌萌哒R][萌萌哒R]
今日仅验证种属是否可靠：左边为老鼠肺组织，右边为人原代支气管上皮细胞。
p2为β tubulin，位置在55kda处。
p3为未活化的白介素1β，位置在30-35kda之间好像。（具体忘了）
p4为活化的白介素1β，理论位置在17kda，但是因为用的胶没跑开10跟15的条带，虽然位置确实在那之上，但还是需要重复一下。
p5为货号。（没显示的IL-1β为R50520-1R1）
il18还没跑，后续换胶能跑开在stripping buffer洗了试试。
（至于为啥没放marker，用的赛默飞的26616，只上了3.5ul，加上我们显影仪最近老是难显出marker，merge了也看不到就没放了[失望R][失望R][失望R]）
wb过程：
1.制胶：自制10％雅酶制胶试剂盒，1.0mm 10孔。
2.上样量：用的别人的蛋白记不清了，好像是30ug 15ul。
3电泳条件：90V上层压平，150V跑到底。
4.转膜条件：200mA湿转40min。膜0.45mm，sigama那个子品牌的膜，理论上0.2mm的更好，但是当时不知道实验室有[笑哭R]。
5.封闭：5％脱脂牛奶封闭2h
6.一抗：内参1:5000，IL-β 1:1000，碧云天一抗稀释液稀释，过夜4度孵育。
7.洗一抗：tbst15min三遍。
8.二抗：1:10000 孵1h，牛奶配置。
9.洗二抗：同7。
10.显影液：内参赛默飞高敏，il 1β 翌圣超敏。
[失望R]不知道为啥膜很脏，可能是裁膜手碰到过，以及牛奶有颗粒，后面再重复一次看看。也希望大佬们提提意见[哭惹R][哭惹R]孩子最近都跑自闭了。
最后鸣谢金主爸爸
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